荧光定量PCR是一种分子生物学技术，用于测量特定DNA或RNA序列在样本中的数量。自20世纪90年代中期问世以来，qPCR已成为生命科学研究中重要的工具，尤其在基因表达分析、基因突变检测、病原体定量等领域发挥着重要作用。
一、原理
荧光定量PCR基于PCR(聚合酶链式反应)技术，通过在PCR反应过程中加入荧光染料或特异性探针，实时监测产物量的变化。随着PCR反应的进行，目标DNA或RNA序列呈指数级扩增，荧光信号也随之增强。通过对荧光信号的捕捉和分析，可以精确计算出目标序列的起始拷贝数。
二、技术特点
1、高灵敏度：能够检测到极低浓度的目标序列，甚至单个拷贝。
2、高特异性：通过引物设计和探针选择，可以精确识别目标序列，避免非特异性扩增。
3、实时性：在PCR过程中实时监测荧光信号，无需后续处理即可获得结果。
4、定量准确性：可以对目标序列进行绝对定量或相对定量，结果准确可靠。
5、高通量：可以同时检测多个目标序列，提高实验效率。
三、实验流程
1、样本处理：根据实验需求对样本进行预处理，如DNA/RNA提取、逆转录等。
2、引物与探针设计：根据目标序列设计特异性引物和探针。
3、PCR反应体系配制：将引物、探针、荧光染料等试剂加入PCR反应体系中。
4、实时荧光PCR扩增：在荧光定量PCR仪上进行实时荧光PCR扩增，记录荧光信号变化。
5、数据分析：利用软件对荧光信号进行分析，计算目标序列的起始拷贝数。
四、荧光定量PCR的应用
1、基因表达分析：通过比较不同样本中特定基因的表达水平，研究基因在不同条件下的表达模式。
2、病原体检测与定量：在病毒、细菌等病原体检测中，通过qPCR可以准确测量病原体载量，评估感染程度和治疗效果。
3、基因突变筛查：用于检测基因突变、基因融合等遗传变异，为疾病的早期诊断和个性化治疗提供依据。
4、转基因产品检测：在农业、食品等领域，用于检测转基因产品的含量和纯度。
5、药物研发：在药物研发过程中，通过qPCR评估药物对目标基因表达的影响，为药物疗效和安全性研究提供数据支持。
