培养基是适于细菌生长繁殖需要的各种营养物质人工配制而成的基质。按营养成分和用途不同,分为基础、合成、营养、鉴别、选择和厌氧培养基。按物理形态分为固体、半固体和液体三类。根据细菌的种类和培养目的不同,可采用不同的培养基。
培养基常用的灭菌方法主要是湿热灭菌和过滤除菌。
1、湿热灭菌:
蒸汽在冷凝时释放出大量潜能,并且蒸汽具有强大穿透力,蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键,使酶失活,微生物因代谢障碍而死亡。湿热灭菌的效果,取决于致死温度和致死时间。致死温度是杀灭微生物的极限温度。致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。分装后应立即灭菌,应在当天内完成灭菌工作,不可过夜。消毒时间不宜过长,也不能超过规定的压力范围,否则有机物质就会在高温下分解,失去营养作用,也会使培养基变质、变色,甚至难以凝固。
2、过滤除菌:
一些抗生素及有机物等,遇热容易分解,不能与培养基一起进行高温灭菌,而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌,例如含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基。过滤后的溶液要立即加入培养基中,若为液体培养基,可在冷却至30℃时加入;若为固体培养基,必须在凝固之前(50-60℃)加入,振荡使溶液与其他成分混合均匀。